Entre AFLP et RFLP | AFLP vs RFLP

Différence clé - AFLP vs RFLP

Les études d'ADN ont une immense importance dans la compréhension et la détermination des relations phylogénétiques, le diagnostic des maladies génétiques et la cartographie des génomes de l'organisme. Plusieurs techniques associées à l'analyse de l'ADN sont également utilisées pour l'identification d'un gène particulier ou d'une séquence d'ADN dans un pool d'ADN inconnu. Ils sont connus comme des marqueurs moléculaires. Polymorphisme de longueur de fragment amplifié (AFLP) et Le polymorphisme de longueur de fragment de restriction (RFLP) est deux marqueurs moléculaires développés en biologie moléculaire pour détecter la variation génétique entre les organismes. Les deux méthodes sont tout aussi importantes et présentent des avantages et des inconvénients. La principale différence entre AFLP et RFLP est que l'AFLP implique une amplification par PCR sélective de l'ADN digéré alors que la RFLP n'implique pas d'amplification par PCR sélective des fragments d'ADN.

TABLE DES MATIÈRES

1. Vue d'ensemble et différence clé

2. Qu'est-ce que AFLP

3. Qu'est-ce que RFLP

4. Comparaison côte à côte - AFLP vs RFLP

5. Résumé

Qu'est-ce que l'AFLP?

L'AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) est un outil important en biologie moléculaire et est largement utilisé dans l'analyse de variation génétique. L'AFLP est basée sur l'amplification PCR spécifique de l'ADN génomique fragmenté et la détection du polymorphisme par autoradiographie via électrophorèse sur gel. AFLP contribue largement à identifier les différences génétiques dans les souches ou les espèces étroitement apparentées de divers règnes, y compris les plantes, les animaux, les bactéries et les champignons. AFLP peut être effectuée avec de petites quantités d'échantillons d'ADN inconnus. Il ne nécessite pas de connaissance préalable de la séquence et la conception des sondes.

- étapes de l'AFLP

Isolement de l'ADN

Digestion de l'ADN avec des endonucléases de restriction
Ligature des fragments d'ADN restreints avec adaptateurs
Amplification sélective des fragments avec restriction spécifique sites
Séparation des produits de PCR par électrophorèse sur gel
Visualisation de la matrice de gel par autoradiographie
AFLP est une méthode plus sensible et reproductible qui peut être utilisée dans le profilage d'ADN de plusieurs taxons incluant les champignons, les bactéries, les plantes et animal sans connaissance préalable des séquences d'ADN. Il aide à identifier de légères différences entre les individus dans les populations en raison de sa nature très sensible. L'AFLP est également importante dans la cartographie du génome, les études médico-légales, les tests parentaux, le génotypage, etc.

Figure 01: AFLP

Qu'est-ce que RFLP?

Les polymorphismes de longueur de fragment de restriction (RFLP) sont une technique utilisée pour détecter les variations génétiques dans des séquences d'ADN homologues.C'est la première méthode développée pour le profilage de l'ADN. Les organismes possèdent des empreintes génétiques uniques ou des profils d'ADN. Le RFLP est un outil important pour analyser la variation entre les profils d'ADN d'organismes intraspécifiques ou étroitement apparentés puisque les séquences homologues ont différents sites de restriction (sites) propres à un organisme particulier. Lorsque l'ADN homologue est digéré avec des endonucléases de restriction spécifiques, il se traduira par différents profils d'ADN qui sont propres à chaque individu. Par conséquent, le principal de cette méthode est la détection de la variation génétique entre les organismes en limitant l'ADN homologue avec des enzymes de restriction spécifiques et l'analyse du polymorphisme de longueur de fragment par électrophorèse sur gel et buvardage. Les modèles de buvardage sont propres à chaque organisme et caractérisent les génotypes spécifiques.

Étapes de RFLP

Isolement d'une quantité suffisante d'ADN à partir d'échantillons

Fragmentation des échantillons d'ADN avec des endonucléases de restriction spécifiques en courte séquence
Séparation des fragments obtenus avec différentes longueurs par électrophorèse sur gel d'agarose.
Transfert du profil de gel dans une membrane par Southern blotting
Hybridation de la membrane avec des sondes marquées et analyse du polymorphisme de longueur de fragment dans chaque profil
RFLP est une technique très importante pour détecter l'héritage de la maladie et trouver le risque de l'apparition de la maladie parmi les membres de la famille. Le RFLP est également fréquemment utilisé dans la cartographie du génome, l'identification des criminels en médecine légale, les tests de paternité, etc. Le RFLP comporte également plusieurs limites. RFLP nécessite la connaissance préalable des données de séquence pour concevoir des sondes pour l'hybridation. Cela nécessite également l'isolement d'une quantité suffisante d'ADN de l'échantillon à analyser, ce qui est difficile dans les études médico-légales.

Figure 01: Cartographie RRFLP

Quelle est la différence entre AFLP et RFLP?

- diff Article Milieu avant Tableau ->

ALFP vs RFLP

AFLP implique une amplification par PCR sélective de l'ADN digéré.
RFLP n'implique pas la PCR à moins que ce soit PCR-RFLP.	Connaissance des séquences
Aucune connaissance préalable de séquence n'est requise.
Une connaissance préalable de la séquence est requise pour les sondes RFLP conçues.	Fiabilité
C'est plus fiable.
Ceci est moins fiable comparé à AFLP.	Efficacité dans la détection du polymorphisme
Ceci a une efficacité supérieure dans la détection du polymorphisme que le RFLP.
Ceci est moins efficace comparé à AFLP.	Coût
C'est un peu cher par rapport à RFLP.
C'est moins cher que l'AFLP.	Les applications
AFLP ont été appliquées à la cartographie du génome, aux empreintes génétiques, aux études de la diversité génétique, aux tests de paternité et à la médecine légale.
L'analyse RFLP est un outil important dans la cartographie du génome, la localisation des gènes pour les maladies génétiques la maladie et les tests de paternité.	Résumé - AFLP et RFLP

AFLP et RFLP sont deux techniques utilisées comme marqueurs génétiques pour l'évaluation de la diversité et l'évaluation des relations génétiques en biologie moléculaire.AFLP sert de méthode efficace et sensible pour la détection du polymorphisme génétique entre les organismes que RFLP. Cependant, bien que ces deux méthodes aient des efficacités différentes dans la détection des variations génétiques, elles sont toujours utilisées pour les empreintes génétiques et le diagnostic de la maladie.

Référence:

'1. Garcia, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, Antônia M. Barbosa, Isaias O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio L. et Anete P. De Souza. "Comparaison des marqueurs RAPD, RFLP, AFLP et SSR pour les études de diversité dans les lignées consanguines de maïs tropicales. "Génétique et biologie moléculaire. Sociedade Brasileira de Genética, 2004. Web. 19 mars 2017

2. "Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). "Centre national d'information sur la biotechnologie. U. S. Bibliothèque nationale de médecine, n. ré. Web. 19 mars 2017

3. Masiga D. K. et Turner C. M. (2004). "Analyse de polymorphisme de longueur amplifiée (de restriction) (AFLP)". Méthodes Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. Web. 19 mars 2017

Courtoisie d'image:

1. "ALFP" Par Barbarossa sur Wikipedia néerlandais - Transféré de nl. wikipedia à Commons. (Domaine public) via Commons Wikimedia

2. "Cartographie RFLP" Par Retama - Travail personnel (GFDL) via Commons Wikimedia