Différence entre le clonage et le sous-clonage | Clonage vs sous-clonage

Le clonage et le sous-clonage sont des procédures biologiques moléculaires qui créent des cellules ou organismes génétiquement identiques portant l'ADN ou le gène qui présentent un intérêt. Le clonage est une technique qui implique l'insertion du gène ou de l'ADN intéressé dans un vecteur, la replication de celui-ci dans une bactérie hôte et la production de cellules ou d'organismes qui sont des copies exactes de la constitution génétique. Le sous-clonage est une technique qui implique l'insertion du gène d'intérêt, déjà inséré dans un vecteur, dans un vecteur secondaire, la réplication de celui-ci dans une bactérie hôte et la production de copies génétiquement identiques de cellules ou d'organismes. La différence clé entre le clonage et le sous-clonage est que

dans le clonage, le gène d'intérêt, une fois ligaturé dans un vecteur, continue le processus de clonage, tandis que dans le sous-clonage, le gène d'intérêt déjà cloné est séparé du vecteur parent et inséré à nouveau dans un vecteur destinataire et poursuivre le processus .

TABLE DES MATIÈRES

1. Vue d'ensemble et différence clé

2. Qu'est-ce que le clonage

3. Qu'est-ce que le sous-clonage

4. Comparaison côte à côte - Clonage vs sous-clonage

5. Résumé

Qu'est-ce que le clonage?

Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques. Dans la nature, le clonage se produit dans les moyens de reproduction asexuée. Lorsqu'il n'y a pas de recombinaison ou d'altération génétique, les cellules filles reçoivent la même constitution génétique du parent. Les organismes procaryotes et eucaryotes créent des clones par fission binaire, bourgeonnement, mitose, etc. En biologie moléculaire, les gènes de clonage ou des fragments spécifiques d'ADN sont une méthode populaire pour étudier la structure et la fonction de cette section particulière d'ADN.

L'objectif principal du clonage moléculaire est de faire des millions de copies de cellules ou d'organismes génétiquement identiques portant le fragment d'ADN d'intérêt (principalement des gènes). Il crée des organismes avec des copies génétiques exactes d'un autre. Principalement, des gènes spécifiques sont clonés dans des études moléculaires pour obtenir des informations structurelles et fonctionnelles et pour le séquençage de l'ADN. En outre, pour la production de protéines ou de produits spécifiques à grande échelle, le clonage est largement utilisé.

Procédure de clonage

Les étapes de base de la procédure de clonage sont les suivantes.

Identification et isolement du gène d'intérêt. (Amplification du gène d'intérêt par PCR).

Digestion par restriction du gène d'intérêt (l'endonucléase de restriction coupe le gène).

Digestion par restriction de l'ADN du vecteur.(L'ADN vecteur est également coupé en utilisant la même endonucléase de restriction).
Insertion du gène dans le vecteur et formation de la molécule recombinante.
Transformation du vecteur recombinant en une bactérie hôte.
Isolement et identification des bactéries transformées (le vecteur plasmidique doit contenir un gène sélectionnable, le plus souvent un gène de résistance aux antibiotiques pour cribler les bactéries transformées).
Expression génique recombinante chez l'hôte.
Figure_01: Procédure de clonage
Qu'est-ce que le sous-clonage?

Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur vers un autre vecteur pour voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité désirée du gène. Dans cette méthode, deux vecteurs sont impliqués; à savoir, le vecteur parent et le vecteur de destination. Les insertions clonées sont à nouveau déplacées dans un second vecteur en sous-clonage. L'objectif du transfert du gène du premier vecteur au second vecteur est d'obtenir quelque chose qui ne pourrait pas être fait par le premier vecteur ou de séparer un gène à nouveau dans le fragment d'ADN déjà clone et de l'exprimer seul. Les enzymes de restriction sont utilisées dans cette procédure au début.

Procédure de sous-clonage

Les étapes de base du sous-clonage sont les suivantes.

A l'aide d'endonucléases de restriction, séparation de l'ADN d'intérêt dans le plasmide donneur (vecteur parent).

Amplification de l'ADN d'intérêt en utilisant la PCR.

Purification du produit de PCR (ADN d'intérêt) par électrophorèse sur gel.
Ouverture du plasmide receveur par les mêmes endonucléases de restriction utilisées pour séparer l'ADN d'intérêt dans le plasmide parent.
Ligature de l'ADN d'intérêt (gène) dans le plasmide receveur pour créer le plasmide sous-cloné.
Transformation du vecteur sous-cloné en une bactérie hôte compétente.
Dépistage des cellules transformées.
Purification de l'ADN plasmidique et utilisation pour le séquençage de l'ADN ou l'expression des gènes pour obtenir les produits désirés.
Le sous-clonage est effectué à l'occasion de l'isolement d'un gène du groupe de gènes clonés ou lorsque le gène d'intérêt est nécessaire pour le transfert dans un plasmide utile pour voir la fonction exacte du gène d'intérêt.
Figure_02: Procédure de sous-clonage

Quelle est la différence entre le clonage et le sous-clonage?

- diff Article Moyen avant Table ->

Clonage vs Sous-clonage

Le clonage est la procédure qui produit des organismes ou des cellules génétiquement identiques.

Le sous-clonage est une procédure consistant à déplacer un gène d'intérêt d'un vecteur vers un autre vecteur pour voir l'expression du gène afin d'obtenir la fonctionnalité désirée du gène.
Processus	Séparation de l'ADN d'intérêt de l'organisme et inséré dans un vecteur une fois et cloné
L'ADN déjà clone est séparé du premier vecteur et inséré dans un second vecteur et cloné.
Insert Movement via Vectors	Ne bouge pas les insertions (ADN d'intérêt) d'un vecteur à un autre vecteur.
Déplace les insertions du vecteur parent vers le vecteur de destination.
Résumé - Clonage vs sous-clonage	Le clonage crée des cellules ou des organismes génétiquement identiques avec le gène inséré ou l'ADN d'intérêt.Il se déroule à travers la séparation et l'insertion de l'ADN d'intérêt dans un vecteur et une expression dans une bactérie hôte. Le sous-clonage partage des étapes similaires avec le clonage. Cependant, dans le sous-clonage, un fragment d'ADN déjà clone (gène d'intérêt) est inséré dans un vecteur et transformé en une bactérie hôte. C'est la différence clé entre le clonage et le sous-clonage.

Références

Lodish, Harvey. "Clonage d'ADN avec des vecteurs plasmidiques. "Biologie cellulaire moléculaire. 4ème édition. U. S. National Library of Medicine, 01 janv. 1970. Web. 05 mars 2017

"Sous-clonage. " Wikipédia. Wikimedia Foundation, 14 février 2017. Web. 06 mars 2017

"Sous-clonage. "Sous-clonage | Articles Open Access | Journaux Open Access | Actes de la conférence | Editeurs | Auteurs | Réviseurs | événements scientifiques. N. p., n. ré. Web. 06 mars 2017
Wackerhage, Henning. "Comment sous-cloner. "Comment sous-cloner. N. p., 01 janv. 1970. Web. 06 mars 2017
Courtoisie d'image
Procédure de clonage moléculaire - Par CNX OpenStax [CC BY 4. 0], via Wikimedia Commons

Procédure de sous-clonage - Par Le téléverseur original était Takometer sur Wikipedia anglais (Transféré de en. wikipedia à Commons.) [CC BY 2. 5], via Wikimedia Commons