SDS Page vs Western Blot

Différence clé - SDS Page vs Western Blot

Western blot est une technique qui détecte une protéine spécifique d'un échantillon de protéines. Cette technique est réalisée par plusieurs étapes clés: électrophorèse sur gel, buvardage et hybridation. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécylsulfate de sodium (SDS Page) est une sorte de technique d'électrophorèse sur gel utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur taille (poids moléculaires). Le transfert Western est une feuille spéciale d'une membrane de transfert qui est utilisée pour transférer le même modèle de protéines dans la page SDS. La différence essentielle entre SDS Page et Western blot est que la page SDS permet la séparation des protéines dans un mélange tandis que le transfert Western permet la détection et la quantification d'une protéine spécifique à partir d'un mélange. Les deux sont utiles dans les études d'analyse de protéines.

TABLE DES MATIÈRES

1. Vue d'ensemble et différence clé

2. Qu'est-ce que la page SDS

3. Qu'est-ce que Western Blot

4. Comparaison côte à côte - Page SDS vs Western Blot

5. Résumé

Qu'est-ce que la page SDS?

SDS Page est une technique d'électrophorèse sur gel utilisée pour la séparation des protéines. Il est couramment utilisé en biochimie, en génétique, en médecine légale et en biologie moléculaire. Une fois les protéines extraites de l'échantillon, elles sont passées sur un gel constitué de SDS et de polyacrylamide. Le SDS est un détergent anionique qui est utilisé pour linéariser les protéines (dénaturer les protéines) et pour impartir une charge négative aux protéines linéarisées proportionnelles à leur masse moléculaire. Polyacrylamide devient le support solide pour le gel. Les protéines dénaturées qui sont chargées négativement migrent vers l'extrémité positive de l'appareil à travers le gel. Selon les tailles des protéines, les vitesses de migration diffèrent entre les protéines et la séparation se produit. Par conséquent, la page SDS est utile pour la séparation des protéines individuelles en fonction de leur taille.

La préparation du gel de polyacrylamide pour le fractionnement des protéines est une étape cruciale de la SDS Page. La concentration correcte de polyacrylamide et le type d'agent de reticulation utilisé affectent fortement les propriétés physiques du gel, ce qui rend la séparation réelle des différentes protéines. Les tailles de pores du gel doivent être correctement gérés pour une séparation efficace. Cependant, SDS Page est considérée comme une technique de séparation des protéines à haute résolution.

La technique SDS Page présente une limitation majeure dans l'analyse des protéines. Puisque le SDS dénature les protéines avant la séparation, il ne permet pas la détection de l'activité enzymatique, des interactions de liaison aux protéines, des cofacteurs de protéines, etc.

Figure 01: SDS Page

Qu'est-ce que le Western Blot?

La technique Western blot permet la détection d'une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines et la mesure de la quantité et du poids moléculaire de la protéine. Le transfert Western est la membrane utilisée pendant la procédure de transfert pour obtenir l'image en miroir des motifs de protéines dans le gel de SDS-polyacrylamide. La membrane qui est utilisée pour le transfert de Western est principalement constituée de nitrocellulose ou de difluorure de polyvinylidène (PVDF). La membrane avec la protéine transférée peut être utilisée pour identifier la protéine désirée. Il nécessite un anticorps de haute qualité pour la détection de la protéine désirée par hybridation. L'anticorps se lie à son antigène spécifique et révèle la présence de l'antigène désiré qui est une protéine.

Le transfert des protéines du gel de SDS polyacrylamide au transfert de Western s'effectue par électrotransfert. C'est une méthode efficace et rapide qui provoque l'électrophorèse des protéines hors du gel et passe sur la membrane de nitrocellulose (Western Blot).

Figure 02: Western Blot

Quelle est la différence entre SDS Page et Western Blot?

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Page SDS vs Western Blot
La page SDS est une technique d'électrophorèse sur gel.	Western blot est une technique qui est effectuée sur une membrane pour détecter une protéine spécifique d'un mélange.
Utiliser
La page SDS permet de séparer les protéines en fonction de leur taille.	Western blot permet le transfert de protéines sur le gel page SDS sans changer son modèle et permet l'hybridation avec des anticorps spécifiques.
Inconvénients
La dénaturation des protéines, le coût élevé et la présence de neurotoxines chimiques sont les inconvénients de cette technique.	Cette technique prend du temps et nécessite de bonnes conditions personnelles et spécifiques contrôlées.

Résumé - SDS Page vs Western Blot

La page SDS et le transfert Western sont deux méthodes impliquées dans l'analyse des protéines. La page SDS permet une séparation facile des protéines sur un gel en fonction de leur poids moléculaire. Le transfert de Western aide à confirmer la présence et la quantité d'une protéine spécifique par hybridation avec des anticorps spécifiques. C'est la différence entre SDS Page et Western Blot.

Références:

1. Blancher, C. et A. Jones. "SDS -PAGE et Western Blot Techniques. "Méthodes en médecine moléculaire. U. S. Bibliothèque nationale de médecine, n. ré. Web. 27 mars 2017

2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig et David H. Petering. "SDS-PAGE native: Séparation électrophorétique à haute résolution de protéines avec rétention de propriétés natives, y compris les ions métalliques liés. "Metallomics: science biométrique intégrée. U. S. Bibliothèque nationale de médecine, mai 2014. Web. 27 mars 2017.

Courtoisie d'image:

1. "SDS-PAGE Electrophoresis" Par Bensaccount sur Wikipedia anglais (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

2. "Western blot 114A" Par Amanthabagdon - Travail personnel (Domaine public) via Commons Wikimedia