Différence entre NGS et Sanger Séquençage | NGS vs Sanger Sequencing

Différence clé - NGS vs séquençage Sanger

Le séquençage de prochaine génération (NGS) et le séquençage Sanger sont deux types de techniques de séquençage nucléotidique développées au fil du temps. La méthode Sanger Sequencing a été largement utilisée pendant de nombreuses années et NGS l'a remplacé récemment en raison de ses avantages. La différence essentielle entre NGS et Sanger Sequencing est que le NGS travaille sur le principe de séquencer des millions de séquences simultanément de manière rapide grâce à un système de séquençage tandis que le séquençage Sanger fonctionne sur le principal de la terminaison de chaîne en raison de l'incorporation sélective des didésoxynucléotides ADN polymérase pendant la réplication de l'ADN et la séparation des fragments résultants par électrophorèse capillaire.

TABLE DES MATIÈRES

1. Vue d'ensemble et différence clé

2. Qu'est-ce que le séquençage nucléotidique

3. Qu'est-ce que NGS

4. Qu'est-ce que Sanger Sequencing

5. Comparaison côte à côte - NGS vs Sanger Sequencing

6. Résumé

Qu'est-ce que le séquençage des nucléotides?

L'information génétique est stockée dans les séquences nucléotidiques de l'ADN ou de l'ARN d'un organisme.

Le processus de détermination de l'ordre correct des nucléotides (à l'aide de quatre bases) dans un fragment donné (dans un gène, un groupe de gènes, un chromosome et un génome complet) est appelé séquençage nucléotidique . Il est très important dans les études génomiques, les études médico-légales, la virologie, la systématique biologique, le diagnostic médical, la biotechnologie et dans de nombreux autres domaines pour analyser la structure et la fonction des gènes. Il existe différents types de méthodes de séquençage développés par les scientifiques. Parmi eux, le Sanger sequencing développé par Frederick Sanger en 1977 a été largement utilisé et popularisé pendant une longue période jusqu'à ce que Next Generation Sequencing le remplace.

Qu'est-ce que NGS?

Le séquençage de prochaine génération (NGS) est un terme utilisé pour désigner les processus modernes de séquençage à haut débit. Il décrit un certain nombre de technologies de séquençage modernes différentes qui ont révolutionné les études génomiques et la biologie moléculaire. Ces techniques sont le séquençage Illumina, le séquençage Roche 454, le séquençage Ion Proton et le séquençage SOLiD (Sequencing by Oligo Ligation Detection). Les systèmes NGS sont plus rapides et moins chers. Quatre méthodes principales de séquençage de l'ADN sont utilisées dans les systèmes NGS, à savoir; le pyroséquençage, le séquençage par synthèse, le séquençage par ligation et le séquençage des semiconducteurs ioniques. Un grand nombre de brins d'ADN ou d'ARN (des millions) peuvent être séquencés parallèlement. Il permet le séquençage de l'ensemble du génome des organismes dans un court laps de temps, contrairement au séquençage Sanger qui prend plus de temps.

NGS présente de nombreux avantages par rapport à la méthode Sanger à séquençage classique. C'est un processus rapide, plus précis et rentable qui peut être réalisé avec une petite taille d'échantillon. La NGS peut être utilisée dans des études métagénomiques, dans la détection de variations au sein d'un génome individuel en raison d'insertions et de délétions, etc., et dans l'analyse des expressions géniques.

Figure_1: Développements dans le séquençage NGS

Qu'est-ce que le séquençage Sanger?

Sanger Sequencing est une méthode de séquençage développée par Frederick Sanger et ses collègues en 1977 pour déterminer l'ordre précis des nucléotides d'un fragment d'ADN donné. Il est également connu sous le nom de

séquençage de terminaison de chaîne ou séquençage de didésoxy . Le principe de fonctionnement de cette méthode est la terminaison de la synthèse des brins par incorporation sélective de didéoxynucléotides terminateurs de chaîne tels que le ddGTP, le ddCTP, le ddATP et le ddTTP par l'ADN polymérase pendant la réplication de l'ADN. Les nucleotides normaux ont des groupes OH en 3 'pour la formation d'une liaison phosphodiester entre des nucleotides adjacents pour continuer la formation de brins. Cependant, les ddNTP manquent de ce groupe OH 3 'et sont incapables de former des liaisons phosphodiester entre les nucléotides. Par conséquent, l'allongement de la chaîne est arrêté. Dans cette méthode, l'ADN simple brin à séquencer sert de brin matrice pour la synthèse d'ADN

in vitro. D'autres exigences sont l'amorce oligonucléotidique, les précurseurs désoxynucléotidiques et l'enzyme ADN polymérase. Lorsque les extrémités flanquantes du fragment cible sont connues, les amorces peuvent être facilement conçues pour la réplication de l'ADN. Quatre réactions de synthèse d'ADN séparées sont effectuées dans quatre tubes séparés. Chaque tube a des ddNTP séparés, ainsi que d'autres exigences. A partir du nucléotide particulier, un mélange de dNTP et de ddNTP est ajouté. De même, quatre réactions distinctes sont effectuées dans quatre tubes avec quatre mélanges. Après les réactions, la détection des fragments d'ADN et la conversion du motif de fragment en informations de séquence sont effectuées. Les fragments d'ADN résultants sont dénaturés à la chaleur et séparés par électrophorèse sur gel. Si des nucléotides radioactifs sont utilisés, le profil de bandes dans le gel de polyacrylamide peut être visualisé par autoradiographie. Lorsque cette méthode utilise les didésoxynucléotides marqués par fluorescence, elle peut être atténuée par le gel lu et passée à travers un faisceau de laser à détecter par le détecteur fluorescent. Pour éviter les erreurs qui pourraient survenir lors de la lecture d'une séquence par l'œil et entrer manuellement dans un ordinateur, cette méthode s'est développée dans l'utilisation du séquenceur automatisé couplé à l'ordinateur. C'est la méthode utilisée pour séquencer l'ADN du projet du génome humain. Cette méthode est encore utilisée avec des modifications avancées car elle donne des informations de séquence précises malgré un processus lent et coûteux.

Figure_2: Séquençage Sanger

Quelle est la différence entre NGS et Sanger Sequencing?

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NGS vs Sanger Sequencing

Le séquençage de nouvelle génération (NGS) fait référence aux processus modernes de séquençage à haut débit.Il décrit un certain nombre de technologies modernes de séquençage
Sanger Sequencing est une méthode de séquençage développée par Frederick Sanger pour déterminer l'ordre précis des nucléotides d'un fragment d'ADN donné.	Rentabilité
Le NGS est un procédé moins coûteux car il réduit le temps, la force motrice et les produits chimiques.
C'est un processus coûteux car il faut du temps, de l'énergie et plus de produits chimiques.	Vitesse
Ceci est plus rapide car la détection chimique et la détection du signal de nombreux brins se produisent en parallèle.
Cela prend du temps car la détection chimique et la détection du signal se produisent en deux processus distincts et que seuls les fils peuvent lire à la fois.	Fiabilité
NGS est fiable.
Le séquençage de Sanger est moins fiable	La taille de l'échantillon
requiert moins de quantité d'ADN.
Cette méthode nécessite une grande quantité d'ADN modèle.	Bases d'ADN par fragment séquencé
Le nombre de bases d'ADN par fragment séquencé est inférieur à la méthode de Sanger
Les séquences génératrices sont plus longues que les séquences NGS.	Résumé - Le séquençage NGS et Sanger

Le séquençage NGS et Sanger sont des techniques de séquençage nucléotidique largement utilisées en biologie moléculaire. Le séquençage Sanger est une méthode de séquençage précoce qui a été remplacée par NGS. La principale différence entre NGS et Sanger Sequencing est que NGS est un processus rapide, plus précis et plus rentable que le séquençage Sanger. Les deux techniques ont créé de grandes épidémies en génétique et en biotechnologie.

Référence:

1. Nowrousian, Minou. "Techniques de séquençage de nouvelle génération pour les microorganismes eucaryotes: solutions basées sur le séquençage des problèmes biologiques. " Cellule eukaryotique. Société américaine pour la microbiologie, septembre 2010. Web. 18 févr. 2017

2. Sanger, F., S. Nicklen et A. R. Coulson. "Séquençage de l'ADN avec des inhibiteurs de terminaison de chaîne. "Actes de l'Académie nationale des sciences 74. 12 (1977): 5463-467. Web.

3. Liu, Lin, Yinhu Li, Siliang Li, Ni Hu, Yimin He, Ray Pong, Danni Lin, Lihua Lu et Maggie Law. "Comparaison des systèmes de séquençage de nouvelle génération. "Journal of Biomedicine and Biotechnology 2012 (2012): 1-11. Web.

Avec l'aimable autorisation de

"Sanger-sequencing" Par Estevezj - Propre travail (CC BY-SA 3. 0) par Commons Wikimedia

"Developments in next generation sequencing" CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia